Technologie výroby inzulínu

  • Prevence

Inzulin je jedním z hormonů produkovaných samotným lidským tělem, konkrétně pankreasem. Porušení sekrece této látky vede k vzniku tak závažného onemocnění, jako je cukrovka. Pro léčbu pomocí syntetického hormonu, který je po dlouhou dobu izolován z pankreasu hospodářských zvířat. Nicméně technologie pro výrobu inzulínu pomocí velmi běžné bakterie - Escherichia coli nebo kvasinkové houby byla používána poměrně dlouho. Použití této metody umožňuje vyhnout se alergickým reakcím způsobeným cizími bílkovinami, které mají nepatrný rozdíl od člověka.

Technologická schéma

Výrobní technologie inzulínu zahrnuje všechny hlavní fáze výroby biotechnologických produktů. Výsledkem je krystalický konečný produkt, který se pak používá k přípravě injekčních roztoků používaných při léčbě těžkého diabetes mellitus typu I a II. Hlavní účinek tohoto hormonu v těle se projevuje poklesem hladiny glukózy obsažené v krvi.

Fáze výroby inzulinu budou následující:

  • Předběžné. Provádí takové operace jako je příprava a čištění vody a vzduchu, čištění průmyslových prostor a sterilizace zařízení, inspekce personálu, zpracování rukou a vydávání sterilních obuvi a oblečení. Také v předběžné fázi se provádí primární chemická syntéza molekulárních řetězců, ze kterých je protein shromážděn. Řetězec A obsahuje 21 aminokyselinových zbytků a řetězec B obsahuje 30 aminokyselin.
  • Příprava živných roztoků a buněčné kultury. Aby živá buňka produkovala potřebnou sloučeninu, je zaveden odpovídající gen. Za tímto účelem se plazmid rozštěpí speciálními enzymy, restriktázami a do nich se do nich šité geny kódující syntézu potřebných sloučenin. Potom se pomocí modifikovaného plazmidu vráti do buňky metodou mikroinjekce.
  • Kultivace buněčné suspenze. Geneticky modifikované buňky se umístí do živného roztoku, který má všechny složky nezbytné pro růst a reprodukci a prochází sterilizací. Kultivace kultury probíhá ve speciálních bioreaktorech, kde se krmí předem vyčištěný vzduch. Pravidelně se do reaktoru přidává určité množství živného roztoku a současně se stáhne stejný objem buněčné suspenze.
  • Přidělování kultury. Separace tekutin a buněčné kultury se provádí sedimentací (sedimentací) ve speciálních sedimentátorech a pak filtrací, což umožňuje zachovat celistvost buněk.
  • Chromatografické čištění látky. Provádí se na vhodném zařízení, přičemž se používají různé metody, zejména čelní, aniontově výměnná a gelová permeační chromatografie.
  • Získání proteinové molekuly. Ve skutečném biotechnologickém stadiu dochází k syntéze nevytvářené molekuly inzulínu. A dvě složky jeho řetězů. Šití se po oxidaci a skládání získaných řetězců, což vede k tvorbě disulfidových můstků.
  • Sušení mrazem ve speciální peci, po které je výsledný krystalický přípravek zkontrolován pro shodu s normou, balen, označen a dodán spotřebiteli.

Naše společnost za příznivých podmínek nabízí hotové výrobní linky, kde je plně dodržována veškerá technologie výroby inzulínu. Díky přesným výpočtům, technické a informační podpoře a personálnímu školení v rámci komplexního programu bude společnost zisková a její produkty budou požadovány.

Druhy inzulinu a způsoby jeho výroby

1. Typy inzulinu

2. Získání inzulinu

Inzulin (z latiny Insula - ostrov) je peptidový hormon, který se tvoří v beta buňkách pankreatických ostrovců Langerhans. Má mnohostranný účinek na metabolismus téměř ve všech tkáních.

Hlavní funkcí inzulínu je zajistit propustnost buněčných membrán pro molekuly glukózy. V zjednodušené podobě lze říci, že nejen sacharidy, ale také veškeré živiny jsou nakonec rozděleny na glukózu, která se používá k syntéze dalších molekul obsahujících uhlík, a je jediným typem paliva pro buněčné elektrárny - mitochondrie. Bez inzulínu propustnost buněčné membrány na glukózu klesá 20krát a buňky umírají z hladovění a přebytečný cukr rozpuštěný v krvi jede tělo.

Porucha sekrece inzulínu v důsledku destrukce beta buněk - absolutní nedostatečnost inzulínu - je klíčovým prvkem v patogenezi diabetes mellitus 1. typu. Porušení účinku inzulínu na tkáň - relativní nedostatek inzulínu - má důležité místo ve vývoji diabetu 2. typu.

Historie objevu inzulínu je spojena s názvem ruského lékaře I.M. Sobolev (druhá polovina 19. století), který dokázal, že hladina cukru v lidské krvi je regulována zvláštním hormonem pankreatu.

V roce 1922 byl inzulín izolovaný z pankreasu zvířete poprvé představen desetiletému diabetickému chlapci. výsledek překonal všechna očekávání a o rok později vydala americká firma Eli Lilly první živočišný inzulínový přípravek.

Po příjmu první průmyslové dávky inzulínu v příštích několika letech byla překročena obrovská cesta izolace a čištění. Výsledkem je, že hormon byl dostupný u pacientů s diabetem 1. typu.

V roce 1935 dánský badatel Hagedorn optimalizoval působení inzulínu v těle navržením prodlouženého léku.

První krystaly insulinu byly získány v roce 1952 a v roce 1954 anglický biochemik G.Senger dešifroval strukturu inzulínu. Vývoj metod pro purifikaci hormonu od jiných hormonálních látek a produktů degradace inzulínu umožnil získat homogenní inzulín, nazývaný jednosložkový inzulín.

V časných 70. letech. Sovětští vědci A. Yudaev a S. Shvachkin navrhli chemickou syntézu inzulínu, nicméně realizace této syntézy v průmyslovém měřítku byla drahá a nerentabilní.

V budoucnu dochází k postupnému zlepšení stupně čištění inzulínů, což snižuje problémy způsobené alergiemi na inzulín, poruchou funkce ledvin, poruchou zraku a odolností proti imunitní inzulínu. Nejúčinnějším hormonem bylo potřeba substituční léčby u diabetes mellitus - homologního inzulínu, tj. Lidského inzulínu.

V osmdesátých letech pokročily molekulární biologie umožnily syntetizovat lidské inzulínové řetězce za použití E. coli, které pak byly spojeny do molekuly biologicky aktivního hormonu a rekombinantní inzulín byl získán u Ústavu bioorganické chemie Ruské akademie věd za použití kmenů E.coli geneticky upravených kmenů.

Použití afinitní chromatografie významně snižuje obsah kontaminujících proteinů v přípravku s vyšší molekulovou hmotností než inzulín. Takové proteiny zahrnují proinzulin a částečně štěpené proinsuliny, které jsou schopné indukovat produkci antiinzulinových protilátek.

Použití lidského inzulínu od samého začátku léčby minimalizuje výskyt alergických reakcí. Lidský inzulín se vstřebává rychleji a bez ohledu na formu léčiva má kratší dobu působení než zvířecí inzulín. Lidské inzulíny jsou méně imunogenní než vepřové, zvláště smíšené bovinní a prasečí inzulíny.

1. Typy inzulinu

Inzulínové přípravky se liší stupněm čištění; zdroj příjmu (skot, prasata, člověk); látky přidané do roztoku inzulínu (prodloužení jeho působení, bakteriostatika atd.); koncentrace; hodnota pH; možnost míchání ICD s SDI.

Inzulinové přípravky se liší podle zdrojů. Vepřový a hovězí inzulín se liší od člověka v složení aminokyselin: skot ve třech aminokyselinách a prasečí v jednom. Není divu, že při léčbě inzulínem skotu se nežádoucí reakce objevují mnohem častěji než při léčbě prasečí nebo lidského inzulínu. Tyto reakce se projevují imunologickou inzulínovou rezistencí, alergií na inzulín, lipodystrofií (změnou podkožního tuku v místě vpichu injekce).

Navzdory zjevným nevýhodám inzulínu skotu se stále používá ve světě. Zatím nedostatky hovězího insulinu v imunologických hlediska jsou zřejmé: je to v žádném případě případ se nedoporučuje u pacientů s nově diagnostikovanou cukrovkou, těhotné ženy nebo pro krátkodobé inzulínové terapie, například v perioperačním období. Negativní vlastnosti jsou zachovány hovězí inzulin a při použití ve směsi s vepřovým masem, ale smísí inzulíny také nelze použít pro terapii těchto kategorií pacientů (vepřové + hovězí).

Přípravky lidského inzulínu pro chemickou strukturu jsou zcela identické s lidským inzulínem.

Hlavním problémem biosyntetické metody získání lidského inzulínu je úplné čištění konečného produktu z nejmenších nečistot používaných mikroorganismů a jejich metabolických produktů. Nové metody kontroly kvality zajišťují, že lidské biosyntetické inzulíny výše uvedených výrobců jsou bez škodlivých nečistot; takže jejich stupeň čištění a účinnost snižování glukózy splňují nejvyšší požadavky a jsou téměř stejné. Jakékoli nežádoucí vedlejší účinky, v závislosti na nečistotách, nemají tyto léky inzulín.

V současné době se v lékařské praxi používají tři typy inzulínů:

- krátký dosah s rychlým nástupem účinku;

- průměrná doba trvání akce;

- dlouho působící s pomalým účinkem.

Tabulka 1. Charakteristika komerčních inzulínových přípravků

Krátkodobě působící inzulín (ICD) - pravidelný inzulín - je krátkodobě působící krystalický zinko-inzulin, který je rozpustný v neutrálním pH, jehož účinek se vyvíjí do 15 minut po subkutánním podání a trvá 5-7 hodin.

První prodloužený inzulín (SDI) byl vytvořen koncem 30. let, takže pacienti mohli podávat injekce méně často než při použití samotné ICD, pokud možno jednou denně. Aby se prodloužila doba trvání účinku, jsou všechny ostatní inzulínové přípravky modifikovány a při rozpuštění v neutrálním médiu tvoří suspenzi. Obsahují protamin ve fosfátovém pufru - protamin zinku-inzulín a NPH (neutrální protamin Hagedorn) - NPH-inzulín nebo různé koncentrace zinku v acetátovém pufru - inzulín ultralest, páska, sedmička.

Inzulínové přípravky se středním trvaním obsahují protamin, což je protein o průměru m. 4400, bohatý na arginin a odvozený od pstruha duhového. Pro tvorbu komplexu je nutný poměr protaminu a inzulínu 1:10. po subkutánním podání proteolytické enzymy zničí protamin, což umožňuje absorpci inzulínu.

NPH-inzulín nemění farmakokinetický profil regulovaného inzulínu, který je s ním smíchán. NPH-inzulín je vhodnější než inzulínová páska jako součást průměrného trvání účinku v terapeutických směsích obsahujících pravidelný inzulín.

Ve fosfátovém pufru všechny inzulíny snadno tvoří krystaly se zinkem, ale pouze krystaly hovězího inzulínu jsou dostatečně hydrofobní, aby poskytly pomalé a trvalé uvolňování inzulínu charakteristické pro ultralest. Krystaly zinku prasečího inzulínu se rozpouštějí rychleji, účinek je dřívější, trvání účinku je kratší. Neexistuje tedy žádná ultrazvuková léčivá obsahující pouze prasečí inzulín. Jednosložkový prasečí inzulin je vyráběn pod názvem inzulínová suspenze, inzulínová neutrální látka, inzulinový isofan, inzulinaminochinurid.

páska Inzulín - směs 30% semilente inzulínu (amorfní sraženinu zinek inzulínu iontů v acetátovém pufru účinek, který rozptyluje poměrně rychle) s 70% inzulinu Ultralente (špatně rozpustné, krystalický zinku inzulín má pomalý nástup a prodloužené působení). Tyto dvě složky poskytují kombinaci s poměrně rychlou absorpcí a stabilním dlouhodobým účinkem, což činí inzulinovou pásku běžnou terapeutickou látkou.

2. Získání inzulinu

Lidský inzulín lze vyrábět čtyřmi způsoby:

1) kompletní chemickou syntézu;

2) extrakce ze slinivky člověka (obě tyto metody nejsou vhodné z důvodu neúčinnosti: nedostatečný vývoj první metody a nedostatek surovin pro sériovou výrobu druhou metodou);

3) polosyntetickou metodou za použití enzymaticko-chemické substituce v pozici 30 B-řetězce aminokyseliny alaninu ve vepřovém inzulínu s threoninem;

4) biosyntetická metoda pro technologie genetického inženýrství. Poslední dvě metody umožňují získat vysoce čistý lidský inzulín.

V současné době se lidský inzulín získává hlavně dvěma způsoby: modifikací vepřového inzulínu syntetickou enzymatickou metodou a metodou genetického inženýrství.

Inzulin byl první protein získaný pro komerční účely za použití technologie rekombinantní DNA. Existují dva hlavní přístupy k získání geneticky modifikovaného lidského inzulínu.

V prvním případě vytvářejí oddělené (různé kmeny producentů) oba řetězce, po nichž následuje skládání molekuly (tvorba disulfidových můstků) a oddělení izoforem.

Ve druhém případě je přípravek ve formě prekurzoru (proinzulin), následovaný enzymatickým štěpením trypsinem a karboxypeptidázou B na aktivní formu hormonu. Nejvýhodnější je v současné době poskytnout inzulin jako prekurzor poskytuje správné uzavření disulfidových můstků (v případě oddělených přijímacích řetězců provedeného po sobě následující cykly denaturace, renaturace a oddělení izoformy).

V obou přístupech je možné jak individuálně získat výchozí složky (řetězce A a B, tak proinzulin) a jako součást hybridních proteinů. Vedle A- a B-řetězců nebo proinzulinu může být přítomno v kompozici hybridních proteinů:

- proteinový nosič, zajišťující transport hybridního proteinu v periplazmatickém prostoru buňky nebo kultivačního média;

- afinitní složku, což velmi usnadňuje výběr hybridního proteinu.

Současně obě složky mohou být současně přítomny v kompozici hybridního proteinu. Navíc při vytváření hybridních proteinů lze použít princip multidimenzionality (tj. Několik kopií cílového polypeptidu je přítomen v hybridním proteinu), což umožňuje významně zvýšit výtěžek cílového produktu.

Ve Spojeném království byly lidské inzulínové řetězce syntetizovány za použití E.coli, které byly potom spojeny s biologicky aktivní molekulou hormonu. Aby jednobuněčný organismus syntetizoval molekuly inzulínu na jeho ribozómech, je nutné mu dodat potřebný program, tedy zavedení hormonového genu do něj.

Chemicky dostat prekurzor biosyntézy programování genu inzulínu nebo dvou genů, programovat odděleně biosyntézu inzulinových řetězců A a B.

Dalším stupněm je zahrnutí genu pro prekurzor inzulínu (nebo řetězových genů odděleně) do genomu E. coli, zvláštního kmene E. coli pěstovaného za laboratorních podmínek. Tento úkol je prováděn pomocí genetického inženýrství.

Plazmid je izolován z E. coli příslušným restrikčním enzymem. Syntetický gen se vloží do plazmidu (klonování s funkčně aktivní C-koncovou částí ß-galaktosidázy E. coli). Výsledkem je, že E. coli získá schopnost syntetizovat proteinový řetězec sestávající z galaktosidázy a inzulínu. Syntetizované polypeptidy se chemicky štěpí z enzymu a potom se čistí. U bakterií se na jednu bakteriální buňku syntetizuje asi 100 000 molekul inzulínu.

Povaha hormonální látky produkované E. coli se určuje tím, který gen se vloží do genomu jednobuněčného organismu. Pokud klonovaného genu prekurzoru inzulínu, bakterie syntetizuje inzulinový prekurzor, který se potom podrobí zpracování restrikčními enzymy pro štěpení prepitida s izolaci C-peptidu, čímž se získá biologicky aktivní inzulín.

Pro purifikovaný lidský inzulín odvozené z biomasy se podrobí fúzního proteinu Khimki enzymatické transformaci a odpovídající Chromatografickým čištěním (fprntalnoy, gelové, výměna aniontů).

Rekombinantní inzulín byl získán u Ústavu RAS pomocí geneticky modifikovaných kmenů E. coli. Prekurzor, hybridní protein vyjádřený v množství 40% celkového buněčného proteinu obsahujícího preproinzulin se uvolňuje z pěstované biomasy. Jeho přeměna na inzulínu vitroosuschestvlyaetsya ve stejném pořadí jako v in vivo - vedoucí rozštěpeného polypeptidu, preproinzulin se převede na inzulín v důsledku oxidačního sulfitoliza následuje redukční uzávěr tří disulfidových vazeb spojujících izolaci a enzymatické C-peptid. Po řadě chromatografických purifikací, včetně výměny iontů, gelu a HPLC, se získá lidský inzulín s vysokou čistotou a přirozenou aktivitou.

Je možno použít kmene plazmidem integrovaným v nukleotidové sekvenci exprimující fúzní protein, který se skládá z lineárního proinzulinu a připojený k methioninový zbytek na N-konci až do konce proteinu fragmentu Staphylococcus aureus.

Kultivace nasycené biomasy buněk rekombinantního kmene zajišťuje zahájení výroby hybridního proteinu, jehož izolace a následná transformace v trubici vede k inzulínu.

Jiný způsob je také možný: v bakteriálním expresním systému se objevuje fúzní rekombinantní protein sestávající z lidského proinzulinu a polyhistidinového ocasu připojeného k němu přes metioninový zbytek. Izoluje se pomocí chelátové chromatografie na kolonách Ni-agarosy z inkluzních těles a štěpí se bromidem kyanogenu.

Izolovaný protein je S-sulfonován. Mapování a hmotnostní spektrometrická analýza výsledného proinzulinu se čistí iontoměničovou chromatografií na anexu a RP (reverzní fáze) HPLC (vysokoúčinná kapalinová chromatografie) ukázala přítomnost disulfidových můstků, což odpovídá disulfidických můstků přirozeného lidského proinzulinu.

Nedávno byla věnována velká pozornost zjednodušení postupu výroby rekombinantního inzulínu metodami genetického inženýrství. Například je možné získat fúzní protein sestávající z vedoucího peptidu interleukinu 2 připojeného na N-konec proinzulinu přes lyzinový zbytek. Protein je účinně exprimován a lokalizován v inkluzních tělesech. Po izolaci se protein štěpí trypsinem za vzniku inzulinu a C-peptidu.

Výsledný inzulin a C-peptid byly čištěny pomocí RP HPLC. Při vytváření fúzních struktur je hmotnostní poměr nosného proteinu k cílovému polypeptidu velmi významný. C-peptidy jsou spojeny na „hlava-ocas“, s rozpěrkami aminokyselin nesoucích restrikční místo Sfil a dvě argininový zbytek na začátku a na konci rozpěrky pro následné štěpení trypsinem proteinu. HPLC produkty štěpení ukazují, že štěpení C-peptidu je kvantitativní a umožňuje to použití metody multimerních syntetických genů k získání cílových polypeptidů v průmyslovém měřítku.

Diabetes mellitus je chronické onemocnění způsobené absolutním nebo relativním nedostatkem inzulínu. Je charakterizován hlubokou metabolickou poruchou sacharidů s hyperglykemií a glukosurií, stejně jako dalšími metabolickými poruchami v důsledku mnoha genetických a vnějších faktorů.

Inzulin k dnešnímu dni slouží jako radikální a ve většině případů jediný způsob, jak udržet život a zdravotní postižení lidí s diabetem. Před přijetím a uvedením inzulínu na kliniku v letech 1922-1923. Pacienti s diabetem mellitus typu I čekali na smrtelný výsledek po dobu jednoho až dvou let od nástupu onemocnění, a to navzdory používání nejsilnějších diet. Pacienti s diabetes mellitus typu I potřebují celoživotní substituční léčbu inzulínem. Ukončení z různých důvodů pro pravidelné zavádění inzulínu vede k rychlému rozvoji komplikací a bezprostřední smrti pacienta.

V současné době je diabetes z hlediska prevalence na 3. místě po kardiovaskulárních a onkologických onemocněních. Podle Světové zdravotnické organizace je prevalence diabetu mezi dospělou populací ve většině oblastí světa 2 až 5% a existuje tendence ke zvýšení počtu pacientů téměř dvakrát za 15 let. Navzdory zřejmému pokroku v oblasti zdravotní péče roste počet pacientů závislých na inzulínu každý rok av současné době pouze v Rusku je asi 2 miliony lidí.

Vytvoření léků domácího lidského genetického inzulínu otevírá nové možnosti řešení mnoha problémů diabetologie v Rusku, aby zachránily životy milionů lidí s diabetem.

Biotechnologie: Učebnice pro střední školy / Ed. N.S. Egorova, V.D. Samuilova.- M.: Vysoká škola, 1987, s. 15-25.

Genetické inženýrství lidského inzulínu. Zlepšení účinnosti chromatografické separace pomocí principu bifuncionality. / Romanchikov, AB, Yakimov, S.A., Klyushnichenko, V.E., Arutunyan, AM, Vulfson, A.N. Bioorganická chemie, 1997 - 23, č. 2

Glick B., Pasternak J. Molekulární biotechnologie. Principy a aplikace. M.: Mir, 2002.

Egorov N. S., Samuilov V. D. Moderní metody tvorby průmyslových kmenů mikroorganismů // Biotechnologie. Prince 2. M.: Vysoká škola, 1988. 208 s.

Imobilizace trypsinu a karboxypeptidázy B na modifikovaném oxidu křemičitém a jejich použití při přeměně rekombinantního lidského proinzulinu na inzulin. / Kudryavtseva N.E., Zhigis L.S., Zubov V.P., Vulfson A.I., Maltsev K.V., Rumsh L.D. Chemické prostředky. J., 1995, 29, č. 1, str. 61-64.

Molekulární biologie. Struktura a funkce proteinů. / Stepanov V. M. / / Moskva, střední škola, 1996.

Základy farmaceutické biotechnologie: Studijní příručka / ETC. Prishchep, V.S. Chuchalin, K.L. Zaikov, L.K. Mikhalev. - Rostov na Donu: Phoenix; Tomsk: Vydavatelství NTL, 2006.

Syntéza fragmentů inzulínu a studium jejich fyzikálně-chemických a imunologických vlastností. / Panin L.E., Tuzikov F.V., Poteryaeva ON, Maksyutov A.Z., Tuzikova N.A., Sabirov A.N. Bioorganic Chemistry, 1997-23, č. 12, str. 953-960.

Předpisy pro výrobu geneticky modifikované inzulínové metody

Úvod> Prezentace> Medicína, zdraví

Státní vzdělávací instituce

vyšší odborné vzdělávání

Kurskská státní lékařská univerzita

Federální agentura pro zdraví a sociální rozvoj

Katedra farmaceutické technologie

k získání geneticky modifikovaného inzulínu za použití biotechnologie rDNA

5. ročník studentů 5 skupin

Ph.D., vedoucí učitel Maravina I.N.

Oddíl I. Charakteristika konečného výrobku 3

Oddíl II. Charakteristika surovin 5

Oddíl III. Schéma chemické výroby 6

Oddíl IV. Technologický plán výroby 7

Sekce V. Průběh výroby a specifikace

Oddíl VI. Procesní prohlášení 10

Oddíl VII. Metody analýzy 14

Oddíl VIII. Bezpečnost, požární bezpečnost,

průmyslová sanitace 16

Oddíl IX. Seznam výrobních pokynů 17

Oddíl I. Charakteristika konečného výrobku

Suchá inzulínová biomasa

Popis. Roztoky inzulínu jsou čirá, bezbarvá nebo slabě nažloutlá kyslá kapalina (pH 2,0-3,5), která se připravuje ředěním krystalického inzulínu ve vodě okyselené kyselinou chlorovodíkovou přidáním glycerolu a 0,25-0,30% roztokem fenolu nebo trikresolu pro konzervování.

Hypoglykemická látka, krátkodobě působící inzulín. Interaktuje se specifickým receptorem ve vnější membráně buněk a tvoří komplex inzulínu a receptoru. Aktivací biosyntézy cAMP v tukových buňkách a jaterních buňkách nebo přímo pronikajících svalových buňkách stimuluje komplex inzulínu a receptoru intracelulární procesy, včetně syntéza řady klíčových enzymů (hexokináza, pyruvát kináza, glykogen syntetáza atd.). Snížení hladiny glukózy v krvi je způsobeno zvýšením intracelulárního transportu, zvýšení absorpce a absorpce tkání, stimulace lipogeneze, glykogenogeneze, syntézy proteinů, snížení rychlosti tvorby glukózy v játrech atd. Délka působení inzulinových přípravků je dána především absorpcí faktorů (z dávky, metody a místa vpichu). Po p / na začátek efektu - po 0,5 h, maximální efekt - po 1-3 hodinách, doba trvání akce - 8 hodin.

Diabetes mellitus 1. typu (závislý na inzulínu). Diabetes mellitus typu 2 (neinvazivní): stupeň rezistence na perorální hypoglykemické léky, částečná rezistence na tyto léky (během kombinované léčby), interkurentní onemocnění, těhotenství.

Na počátku léčby - zhoršení zraku, otok končetin. Zavedením příliš velkých dávek inzulínu nebo porušením stravy (přeskočení jídla) a nadměrným cvičením hypoglykemie (studený pot, bledá kůže, nervozita, třes, úzkost, nadměrná únava nebo slabost, dezorientace, závratě, bolesti hlavy, výrazný pocit hladu, dočasné zhoršení zraku, nevolnost, tachykardie, v těžkých případech - ztráta vědomí, kóma). Systémové alergické reakce: zvýšené pocení, zvracení, potíže s dýcháním, palpitace, závratě.

Doba použitelnosti - 1 rok od data výroby.

Oddíl II. Charakteristika surovin

Řetězy genů kódujících syntézu řetězců A a B

Chemicky syntetizováno

Kultura musí být čistá

Čtyřvrstvé papírové tašky

Tkaniny podle bavlněného pásku

Oddíl III. Schéma chemické výroby

Chemické transformace ve výrobě geneticky modifikovaného inzulínu chybí.

Oddíl IV Technologická schéma pro výrobu inzulinu

Příprava prostor a zařízení

Výroba sanitárního zpracování

Příprava technologického oblečení

Syntéza řetězců A a B

Zavedení genů do plazmidu

Zavedení r-DNA do permisivní buňky

Příprava živin

Kultivační kultivační suspenze

Získání molekuly inzulínu

Podle ukazatelů FS

Instrumentální výrobní schéma a specifikace zařízení

1 - Chemický reaktor

2 - Zavedení genů do plazmidu

4 - Jednotka kontinuální sterilizace

5 - Průmyslový bioreaktor

6 - Výběr řetězů

7 - Chromatografická instalace

8 - získání molekuly inzulínu

9 - Sušička mrazem

10 - Analytická tabulka

Oddíl VI. Popis procesu

BP 1. Příprava vody

Membránové destilátory jsou určeny k získání odsolené vody, která splňuje požadavky GOST 6709-97 "Destilovaná voda". Produktivita destilátorů - od 3 do 15 l / hod (laboratorní instalace v ekonomické kompletní sadě), a také od 5-30 l / h (laboratorní instalace). Filtrační proces zahrnuje následující fáze: předúpravu na aktivním uhlí, membránovou filtraci a deionizaci vody pomocí iontoměničových pryskyřic. Předfiltr odstraňuje suspendované částice, chlor, vysokomolekulární organické látky a ionty těžkých kovů z přívodní vody z vodovodu. Membránová filtrace je založena na fenoménu reverzní osmózy, při níž je voda, při průchodu přes semipermeabilní membránu, čištěna od solí rozpuštěných v ní, organických nečistotách s nízkou molekulovou hmotností, stejně jako bakterií a mikroorganismů. Na filtru s iontoměničovými pryskyřicemi se provádí úplné čištění filtrátu z rozpuštěných solí.

BP 2. Sanitární zpracování výroby.

BP 2.1. Na výrobu sterilních lékových forem jsou umístěny následující požadavky:

Musí být udržována v bezvadné čistotě, podléhat povinnému každodennímu i obecnému čištění a pravidelným opravám;

Může být vystaven UV záření pro dezinfekci vzduchu pomocí stacionárních nebo přenosných ozáření;

Musí mít osvětlení, teplotu, vlhkost a ventilaci, které nemají přímý ani nepřímý negativní dopad na kvalitu hotových výrobků;

Musí obsahovat minimum nutné pro vedení výrobního procesu množství zařízení a nábytku;

Párování mezi stěnami, podlahou a stropem musí mít zaoblený tvar;

V prostorách tříd I a II čistoty by neměly existovat žádné otevřené komunikace, vzduchové kanály;

Prostory vyšší třídy čistoty by měly být umístěny v místnosti nižší třídy čistoty. Přístup pracovníků a surovin do čisté místnosti se provádí pouze prostřednictvím vzduchových brán, které jsou dodávány s přívodem sterilního vzduchu podle schématu "zhora-dolů";

Přeprava hotového výrobku musí být provedena pomocí dopravníku procházejícího stěnami.

BP 2.2. Příprava zařízení

Požadavky na přípravu zařízení:

Zařízení musí být navrženo a umístěno tak, aby jeho provoz, údržba a opravy byly prováděny mimo "čisté" prostory;

Zařízení používaná pro práci v aseptických podmínkách musí mít záznamové zařízení pro sledování parametrů procesu a přítomnost poplašných zařízení pro jeho poruchu;

Zařízení musí být vyčištěno, dezinfikováno a v případě potřeby sterilizováno;

Zařízení musí být monitorováno z hlediska mikrobiologické čistoty;

Pracovní plocha zařízení by měla být hladká, od netoxického a nekorozivního materiálu.

BP 2.3. Školení zaměstnanců

Požadavky na zaměstnance:

Zaměstnanci musí mít minimální znalosti o hygienických pravidlech, hygienických pravidlech a pravidlech GMP;

Zaměstnanci s infekčními chorobami, otevřenými ranami na kůži a nosiči patogenní mikroflóry se nesmí pracovat;

Je zakázáno mluvit, jíst jídlo, pohybovat se rychle na pracovišti;

Přísně dodržujte osobní hygienu, odstraňte kosmetiku z obličeje a odstraňte šperky před vstupem do "čisté" místnosti;

Vezměte si sprchu, umyjte a vyčistěte ruce dezinfekčními prostředky, nasaďte si sadu sterilních technologických oděvů a obuvi.

BP 3. Syntéza řetězců A a B

Syntéza řetězců se provádí chemickou metodou. Řetězec A obsahuje 21 aminokyselinových zbytků, řetězec B - 30 zbytků

BP 4. Zavedení genů do plazmidu.

Aby mohl plazmid přijmout cizí gen, jeho řetězec se štěpí restrikčními enzymy. Pro spojení genů kódujících syntézu řetězců A a B se používají oligosacharidové zbytky různých délek - linkery a adaptéry. Když je molekula uzavřena, můžete ji vložit do tolerantní buňky.

BP 5. Zavedení r-DNA do permisivní buňky.

Zavedení p = DNA do buňky E. coli se provádí mikroinjekcí: plazmid obsahující vektorovou DNA se vstřikuje do buňky E. coli se speciální jehlou ultratenkého skla.

TP 6. Příprava živného média

Hlavním živným médiem pro kultivaci kultury E. coli je vývar podle Millera. Složení: hydrolyzát kaseinu, kvasnicový extrakt, chlorid sodný, agar-agar. Konečná hodnota pH (při 25 ° C) je 7,0 ± 0,2. Používá se také Hottingerův vývar. Složení: Hydrolyzát Hottinger, chlorid sodný, destilovaná voda.

Sterilizace živného média se provádí ve stroji pro kontinuální sterilizaci - ONS. Živné médium postupně prochází topnou částí, přídržnou částí a chladicí částí.

TP 7. Kultivace kultury suspenze

Pěstování v biokulturách se provádí v bioreaktorech, přičemž suspenze se kultivuje v důsledku přivádění vzduchu do bioreaktoru. Způsob se provádí v polořadovickém režimu, kdy se do bioretátoru nepřetržitě přidává určité množství čerstvého živného média a současně se odebírá stejný objem buněčné suspenze.

TP 8. Izolace tkáňové kultury.

Oddělení tkáňové kultury od živného média se provádí metodou sedimentace (sedimentace) v sedimentech, hlubší separace je zajištěna filtrací jemné metody k zachování integrity kulturních buněk.

Inzulin je purifikován chromatografickými metodami: čelní, gelová permeace, výměna aniontů. Čištění inzulinu a jeho derivátů na sorbentech se silnými vlastnostmi výměny kationtů (například SP-Sepharose FF) lze použít pufrovací systémy na bázi octanu amonného s nízkým obsahem močoviny (do 2 M nebo méně).

TP 10. Získání molekuly inzulínu

Vybrané a vyčištěné řetězce jsou složeny a oxidovány, což zajišťuje tvorbu vhodných disulfidových můstků.

Sušení produktu se provádí v mrazničce.

TP 12. Hodnocení kvality hotového výrobku.

Vzhled (jak je popsáno), aktivita (biologická metoda).

UMO 13. Balení, označování, zásilka.

Aktivita inzulínu se měří v akčních jednotkách (ED) nebo v mezinárodních akčních jednotkách (IU - ruština nebo IU - angličtina nebo UI - francouzština). 1 jednotka odpovídá aktivitě 1/24 mg (41,66 μg) krystalického inzulínu.

V roce 1922 Frederick Banting navrhl, aby jednotka inzulínové aktivity byla považována za počet kubických centimetrů pankreatického extraktu, který během 2-4 hodin přinesl zdravému králičímu k hypoglykémii s hladinou SC 2,5 mmol / l. O něco později ve stejném roce tentýž tým navrhl jednotku "myši" - množství inzulínu potřebné k přenesení poloviny experimentální skupiny myší na křeče (výzkumníci zde původně jednali analogicky s LD50).

Následující rok Mezinárodní výbor pro normalizaci přijal definici inzulínové akční jednotky: "Množství inzulinu potřebné ke snížení hladiny glukózy v krvi na úroveň, při které začínají záchvaty u králíků o hmotnosti 2 kg, které nebyly krmeny po dobu 24 hodin." Tato jednotka, na počest Torontské skupiny Banting a Best, byla jmenována inzulinovou jednotkou Toronto.

V roce 1925 byl zaveden první mezinárodní standard, který stanovil, že jedna jednotka inzulinového účinku je množství odpovídající 1/8 mg krystalického inzulínu.

Vzhledem k velkému pokroku v léčbě inzulínu a obtížím s použitím takové velké jednotky v roce 1936 schválila komise Společnosti národů nový mezinárodní standard pro působení inzulínu, který se rovnal jednotce 1/22 mg krystalického inzulínu. V roce 1952 byl standard znovu změněn a jedna jednotka byla srovnávána s 1 / 24,5 mg krystalického inzulínu a v roce 1958 se konečně objevila čtvrtá norma (1 U se rovná 1/24 mg krystalického inzulínu). WHO provedla v roce 1982 nejnovější úpravy standardu, které neovlivnily definici jednotky, ale týkaly se pouze změn spojených s výskytem lidského geneticky modifikovaného inzulínu.

Oddíl VIII. Bezpečnost, požární bezpečnost a

Každý pracovník a technický pracovník po obdržení práce musí absolvovat primární výuku. Primární instruktáž provádí předák nebo velitel podle následujícího programu:

Hlavní ustanovení právních předpisů týkajících se ochrany práce, bezpečnosti, průmyslové hygieny;

Účel a postup použití speciálního oděvu a osobních ochranných prostředků;

Povinnosti na pracovišti;

Požadavky na správnou organizaci a údržbu pracoviště;

Obecná pravidla elektrické bezpečnosti, hodnota ventilace a pravidla pro používání ventilačních systémů;

Poznání technologického procesu, zařízení a všech nebezpečných objektů.

Všechna elektrická zařízení musí splňovat požadavky "Pravidel pro provoz elektrických zařízení". Elektrické zařízení musí být uzemněno. Všechny výrobní a provozní prostory, instalace a zařízení by měly být vybaveny hasicími zařízeními a hasicími zařízeními.

Přijetí neoprávněných osob do obchodu je zakázáno.

Oddíl IX. Seznam výrobních pokynů

Pracovní pokyny pro hygienické ošetření prostor.

Pokyny pro bezpečnost, průmyslovou hygienu a požární bezpečnost.

Pokyny pro přípravu, dodání a příjem opravy zařízení.

Pokyny k přijímání surovin a pomocných materiálů;

Plán odstraňování nehod.

Pokyny pro regeneraci roztoku.

Pracovní pokyny pro obsluhu praní, sušení a sterilizaci lahví.

Pokyny pro mechaniku při opravách a údržbě potrubí.

Technologie výroby inzulínu

Insulin.docx

Kapitola 1. Literární recenze

1.3. Stříkačky, pera a dávkovače inzulínu

1.4 Technika vstřikování inzulínu.............................................

1.5.Faktory ovlivňující absorpci a působení inzulínu.........

1.6. Komplikace inzulinové terapie............................................

1.7. Inzulínové balení

1.8. Skladování inzulínu.

1.9. Moderní způsoby zlepšení léčby inzulínem.....

Kapitola 2. Experimentální část

Inzulín (z latiny. Insula - ostrov) - peptidový hormon, se vytváří v beta buňkách ostrovů Langerhans pankreatu. Má mnohostranný účinek na metabolismus téměř ve všech tkáních.

Hlavní funkcí inzulínu je zajistit propustnost buněčných membrán pro molekuly glukózy. V zjednodušené podobě lze říci, že nejen sacharidy, ale také veškeré živiny jsou nakonec rozděleny na glukózu, která se používá k syntéze dalších molekul obsahujících uhlík, a je jediným typem paliva pro buněčné elektrárny - mitochondrie. Bez inzulínu propustnost buněčné membrány na glukózu klesá 20krát a buňky umírají z hladovění a přebytečný cukr rozpuštěný v krvi jede tělo.

Porucha sekrece inzulínu v důsledku destrukce beta buněk - absolutní nedostatečnost inzulínu - je klíčovým prvkem v patogenezi diabetes mellitus 1. typu. Porušení účinku inzulínu na tkáň - relativní nedostatek inzulínu - má důležité místo ve vývoji diabetu 2. typu.

Počet lidí s diabetem po celém světě je 120 milionů (2,5% populace). Každých 10 až 15 let se počet pacientů zdvojnásobuje. Podle Mezinárodního institutu diabetu (Austrálie) do roku 2010 bude na světě 220 milionů pacientů. Na Ukrajině je asi 1 milion pacientů, z nichž 10-15% trpí nejzávažnějším diabetem závislým na inzulínu (typ I). Ve skutečnosti je počet pacientů 2-3krát vyšší kvůli skrytým nediagnostikovaným formám.

Historie objevu inzulínu je spojena s názvem ruského lékaře I.M. Sobolev (druhá polovina 19. století), který dokázal, že hladina cukru v lidské krvi je regulována zvláštním hormonem pankreatu.

V roce 1922 byl inzulín izolovaný z pankreasu zvířete poprvé představen desetiletému diabetickému chlapci. výsledek překonal všechna očekávání a o rok později vydala americká firma Eli Lilly první živočišný inzulínový přípravek.

Po příjmu první průmyslové dávky inzulínu v příštích několika letech byla překročena obrovská cesta izolace a čištění. Výsledkem je, že hormon byl dostupný u pacientů s diabetem 1. typu.

V roce 1935 dánský badatel Hagedorn optimalizoval působení inzulínu v těle navržením prodlouženého léku.

První krystaly insulinu byly získány v roce 1952 a v roce 1954 anglický biochemik G.Senger dešifroval strukturu inzulínu. Vývoj metod pro purifikaci hormonu od jiných hormonálních látek a produktů degradace inzulínu umožnil získat homogenní inzulín, nazývaný jednosložkový inzulín.

V časných 70. letech. Sovětští vědci A. Yudaev a S. Shvachkin navrhli chemickou syntézu inzulínu, nicméně realizace této syntézy v průmyslovém měřítku byla drahá a nerentabilní.

V budoucnu dochází k postupnému zlepšení stupně čištění inzulínů, což snižuje problémy způsobené alergiemi na inzulín, poruchou funkce ledvin, poruchou zraku a odolností proti imunitní inzulínu. Nejúčinnějším hormonem bylo potřeba substituční léčby u diabetes mellitus - homologního inzulínu, tj. Lidského inzulínu.

V osmdesátých letech pokročily molekulární biologie umožnily syntetizovat lidské inzulínové řetězce za použití E. coli, které pak byly spojeny do molekuly biologicky aktivního hormonu a rekombinantní inzulín byl získán u Ústavu bioorganické chemie Ruské akademie věd za použití kmenů E.coli geneticky upravených kmenů.

Účel mé práce: Studium inzulinových přípravků prezentovaných na našem trhu, jejich výhody a nevýhody.

Úkoly: Posouzení procesu získávání inzulinu v průmyslové výrobě.

Kapitola 1. Literární recenze

1.1 Získání inzulinu

Lidský inzulín lze vyrábět čtyřmi způsoby:

1) kompletní chemickou syntézu;

2) extrakce ze slinivky člověka (obě tyto metody nejsou vhodné z důvodu neúčinnosti: nedostatečný vývoj první metody a nedostatek surovin pro sériovou výrobu druhou metodou);

3) polosyntetickou metodou za použití enzymaticko-chemické substituce v pozici 30 B-řetězce aminokyseliny alaninu ve vepřovém inzulínu s threoninem;

4) biosyntetická metoda pro technologie genetického inženýrství. Poslední dvě metody umožňují získat vysoce čistý lidský inzulín.

Zvažte biosyntetický příjem inzulínu, pokud jde o výhody této metody.

Takže výhody biosyntetického získání inzulínu.

Před zavedením metody produkce inzulinu pomocí rekombinantních mikroorganismů do průmyslu existoval pouze jeden způsob, jak získat inzulín - z pankreasových žláz skotu a prasat. Inzulin pocházející ze slinivky břišní se liší od lidského inzulínu třemi aminokyselinovými zbytky a inzulin získaný z prasečí žlázy je pouze jeden aminokyselinový zbytek, tj. Je blíže k lidskému inzulínu. Avšak při zavádění bílkovin, které se liší strukturou od lidských bílkovin, i v tak malém výrazu mohou nastat alergické reakce. Takový inzulín jako cizí protein může být v krvi inaktivován také výslednými protilátkami.

Navíc k získání 1 kg inzulínu je vyžadováno 35 tisíc prasat (pokud je známo, že roční potřeba inzulinu je 1 tuna léku). Na druhou stranu, mohou být připraveny stejnou biosynteticky biosyntézu inzulínu kolichesvto provádí v 25 ml fermentoru za použití rekombinantní mikroorganismus je Escherichia coli.

Biosyntetický způsob získání inzulínu byl aplikován na počátku 80. let

Podívejme se na schéma výroby rekombinantního inzulínu (Eli Lilli-Eli-Lilly, Spojené státy americké):

Stupeň 1. Chemickou syntézou byly vytvořeny nukleotidové sekvence, které kódují tvorbu řetězců A a B, tj. Byly vytvořeny syntetické geny.

2. stupeň. Každý ze syntetických genů je zaveden do plazmidu (do jednoho plazmidu je zaveden řetězec syntetizující gen A a do druhého plazmidu je zaveden řetězec B pro syntézu genu).

3. stupeň. Zadejte gen kódující tvorbu enzymu betagalaktozidázy. Tento gen je zahrnut v každém plasmidu za účelem dosažení intenzivní replikace plazmidů.

4. etapa. Plazmidy se zavádí do Escherichia coli buňky - Escherichia coli a získávají se dvě produkující kultury, jedna kultura syntetizuje A řetězec, druhý řetězec B.

5. etapa. Do fermentoru umístěte dvě kultury. Ve středu přidává galaktózu, která indukuje tvorbu enzymu betagalaktozidázy. V tomto případě plazmidy aktivně replikují, vytvářejí mnoho kopií plazmidů, a proto mnoho genů syntetizujících A a B řetězce.

6. etapa. Buňky lýzají, vylučují A a B řetězce, které jsou spojeny s betagalaktozidázou. To vše se zpracuje bromidem kyanogenu a řetězce A a B se štěpí z beta-galaktozidázy. Potom provede další čištění a výběr řetězců A a B.

7. etapa. Cysteinové zbytky jsou oxidovány, vázány a připraveny inzulínem.

Inzulínem získaným tímto způsobem je lidský inzulín ve své struktuře, který od počátku léčby minimalizuje výskyt alergických reakcí.

K získání purifikovaného lidského inzulínu se hybridní protein izolovaný z biomasy podrobí chemicko-enzymatické transformaci a vhodnému chromatografickému čištění (frontální, gel-penetrační, aniontová výměna).

Institut RAS rekombinantní inzulín připraví s použitím geneticky upravené kmeny E. coli je způsob syntézy jeho biologickým prekurzorům proinzulínu, a umožňuje neprovádět oddělenou syntézu A a B inzulínu řetězce. Pro výrobu proinzulinové části molekuly v E. coli. plazmid je zaveden (je získán vložením přirozené nebo cizí DNA - tak se získá molekula rekombinantní RNA). Plazmid poskytuje syntézu rekombinantního proteinu, který je vedoucí sekvencí a fragment proteinu, stejně jako lidský proinzulin s metioninovým zbytkem (aminokyselinou) mezi nimi. Proinzulinová část molekuly se oddělí působením bromu kyanitým v kyselině octové (štěpení se provádí selektivně - methioninovým zbytkem). Směs (proinzulínová a vedoucí sekvence) se oddělí chromatografií. V dalším stupni se ve výsledné sekvenci proinzulinu provede správné vzájemné uspořádání řetězců A a B, které se provádí pomocí centrální části peptidu C. V dalším stupni se peptid vazebného C izoluje enzymatickou metodou. Po řadě chromatografických purifikací, včetně iontové výměny, gelu a HPLC, dostávám vysoce čistý lidský inzulín a přirozenou aktivitu.

Kontrola kvality geneticky inzulínu předpokládá kontrolu i dalších parametrů, charakterizujících stabilitu rekombinantního kmene a plasmidů, nepřítomnosti cizího genetického materiálu v přípravku, o totožnosti exprimovaného genu a ostatními.

1.2 Inzulinové přípravky

Inzulinové přípravky se liší podle zdrojů. Vepřový a hovězí inzulín se liší od člověka v složení aminokyselin: skot ve třech aminokyselinách a prasečí v jednom. Není divu, že při léčbě inzulínem skotu se nežádoucí reakce objevují mnohem častěji než při léčbě prasečí nebo lidského inzulínu. Tyto reakce se projevují imunologickou inzulínovou rezistencí, alergií na inzulín, lipodystrofií (změnou podkožního tuku v místě vpichu injekce).

Navzdory zjevným nevýhodám inzulínu skotu se stále používá ve světě. Zatím nedostatky hovězího insulinu v imunologických hlediska jsou zřejmé: je to v žádném případě případ se nedoporučuje u pacientů s nově diagnostikovanou cukrovkou, těhotné ženy nebo pro krátkodobé inzulínové terapie, například v perioperačním období. Negativní vlastnosti jsou zachovány hovězí inzulin a při použití ve směsi s vepřovým masem, ale smísí inzulíny také nelze použít pro terapii těchto kategorií pacientů (vepřové + hovězí).

Přípravky lidského inzulínu pro chemickou strukturu jsou zcela identické s lidským inzulínem.

Hlavním problémem biosyntetické metody získání lidského inzulínu je úplné čištění konečného produktu z nejmenších nečistot používaných mikroorganismů a jejich metabolických produktů. Nové metody kontroly kvality zajišťují, že lidské biosyntetické inzulíny výše uvedených výrobců jsou bez škodlivých nečistot; takže jejich stupeň čištění a účinnost snižování glukózy splňují nejvyšší požadavky a jsou téměř stejné. Jakékoli nežádoucí vedlejší účinky, v závislosti na nečistotách, nemají tyto léky inzulín.

Inzulinové přípravky, v závislosti na nástupu a trvání účinku, jsou rozděleny do následujících skupin:
1) inzulíny rychlého a ultra krátkého působení;
2) krátkodobě působící inzulíny ("jednoduché" inzulíny);
3) středně dlouhé inzulíny ("střední" inzulíny);
4) dlouhodobě působící inzulíny;
5) "smíšené" inzulíny - kombinace inzulinu s různou dobou trvání účinku.

Počet inzulinových přípravků s různými názvy je několik desítek a každoročně se přidávají nové názvy inzulinu z různých zahraničních a v posledních letech domácí farmaceutické společnosti.

Rychlé a ultra krátké inzulíny

Rychlé a ultra krátké inzulíny v současné době zahrnují tři nové léky - lispro (humalog), aspart (novoid, novolog) a glulissin (apidra). Jejich zvláštnost je v rychlejším začátku a konci akce v porovnání s obvyklým "jednoduchým" inzulínem člověka. Rychlý nástup snížení hladiny glukózy u nových inzulínů je způsoben jejich zrychlenou absorpcí z podkožního tuku. Vlastnosti nových inzulínu může snížit dobu mezi injekcemi a jejich příjmu potravy, snížení poslepischevoy glukózy v krvi a snížení výskytu hypoglykémie.

Platí lispro, aspart a glyulizina se vyskytuje v rozmezí od 5 do 10 až 15 minut, maximální účinek (akce vrchol) - po 60 minutách, trvání - 3 - 5 hodin. Tyto inzulíny se podávají 5 až 15 minut před jídlem nebo těsně před jídlem. Bylo zjištěno, že podávání inzulínu lispro ihned po jídle zajišťuje dobrou kontrolu glykemie. Je však důležité si uvědomit, že podávání těchto inzulínů 20 až 30 minut před jídlem může vést k hypoglykémii.

Pacienti, procházející na zavedení těchto inzulínů, že je nutné kontrolovat hladinu glukózy v krvi častěji, dokud se učí týkají příjem sacharidů a dávky inzulínu. Proto se dávky léků nastavují individuálně.

Pokud se použije pouze Humalog (inzulín lispro), nebo nového Rapid Novolog (inzulín aspart) nebo Apidru (inzulín glyulizin), mohou být podávány na 4 - 6-krát denně, a v kombinaci s dlouhodobě působících inzulínů - 3 krát denně. Nadbytečná jednorázová dávka 40 U je přípustná ve výjimečných případech. Tyto inzulíny, které jsou k dispozici v lahvičkách, mohou být v téže stříkačce smíchány s lidskými inzulínovými přípravky s delší dobou trvání účinku. Když se tento vysokorychlostní inzulín nejprve shromáždí v injekční stříkačce. Injekce je žádoucí provést ihned po míchání. Tyto inzulíny vyrobené v kazetách (speciální rukávy) nejsou určeny pro přípravu směsí s jiným inzulínem.

To je důležité!
Nové vysokorychlostní inzulíny jsou vhodné pro pacienty, kteří vedou aktivní životní styl, jejich použití se doporučuje pro akutní infekce, emoční stres, zvýšení množství sacharidů v potravinách, užívání léků, které podporují hyperglykémii (hormony štítné žlázy, kortikosteroidy - prednisolon apod.), S dalšími nesnášenlivostmi inzulínové přípravky nebo post-nutriční hyperglykemii, která je špatně ovlivněna působením jiných inzulínů. Je třeba znovu zdůraznit, že rychle působící inzulíny by měly být použity v přímé souvislosti s příjmem potravy.